产品信息
背景
内毒素是革兰氏阴性细菌细胞壁中的一种成分，是由菌体裂解后释出的毒素，是最为常
见的生物热原。如果高剂量的内毒素进入体内会导致严重的热原反应，引起人体发热、休克
甚至死亡。而且内毒素相比于细菌更加难以灭活，在制药和医疗器械等领域中需要对产品进
行严格的内毒素检测分析，以避免发生热原反应事故。
上个世纪 60 年代的研究人员发现鲎（马蹄蟹）的血液细胞和变形细胞能够与革兰氏阴
性菌内毒素发生凝结，认识到鲎的血液制品能够作为检测内毒素的方法，由此开发出的鲎试
剂（LAL）检测内毒素的方法在 70 年代得到认可并被世界各国广泛采用并认定为法定的细
菌内毒素检查方法。LAL 包括三种蛋白酶原，在内毒素作用下产生一个级联反应。内毒素首
先激活其中的 C 因子，C 因子活化后激活 B 因子，B 因子再将其中的凝固酶原转化为凝固
酶，由凝固酶使凝固蛋白原转化为凝固蛋白，产生凝胶。因此可以通过凝胶的形成来推断样
本中的内毒素水平。
但是鲎试剂也具有无法克服的缺点，LAL 除了能与内毒素发生反应之外，还会与（1-3）
-β-D-葡聚糖反应，造成假阳性结果。并且因为使用鲎血液作为原料，其成分复杂，由于地域
和季节等差异，不同批的次稳定性成为问题。再加上由于人类活动导致的海洋环境的破坏，
鲎数量种群也在不断减少，导致原材料获取的短缺。而随着人用和动物用的药物制剂及医疗
器械需求迅速增长，寻求一个替代 LAL 检测内毒素的有效方法变得越来越重要。重组 C 因
子内毒素检测试剂盒是一种不含动物制品的 LAL 替代方案，目前一些国家的药品管理机构
如美国 FDA 等已经许可将其作为内毒素检测的一种替代方法。
原理
鲎 C 因子是一种丝氨酸蛋白酶原，与内毒素结合后被激活为丝氨酸蛋白酶，C 因子是
鲎血液凝血级联反应中的第一步，能够首先被内毒素所激活并启动下游的级联反应。
重组 C 因子内毒素检测试剂盒主要由重组 C 因子和荧光底物等部分组成。重组 C 因子
是以基因重组的方式表达的 LAL 试剂中的 C 因子，C 因子被内毒素激活后切割荧光底物产
生游离荧光基团，通过检测荧光信号可以反应激活后的蛋白酶活性，并由此可以推算出内毒
素的含量。
特点及优势
重组 C 因子内毒素检测试剂盒检测方法简单，反应快速，避免了 LAL 可能出现的假阳
性结果，具有更高的特异性，更好的精密度和准确度，且不依赖于动物源性成分，具有以下
特点：
1. 使用荧光测定，与其它定量 LAL 方法相当；
2. 检测方法简单，操作便捷；
3. 可进行多个样本的检测，反应时间短；
4. 检测灵敏度好，最低可到 0.005 EU/mL；
5. 具有更好的精密度和准确度；
6. 特异性好，无 G 因子β-葡聚糖假阳性干扰情况；
7. 不依赖于动物源成分，避免试剂来源受限，可稳定且持续提供；
8. 重组表达生产，产品批间一致性较好，避免动物来源成分不稳定问题。
检测方法简介
检测在 96 孔板中进行，加样后在分别在零小时和 37℃孵育一小时后使用酶标仪设定激
发/发射波长 380/440nm 检测每孔荧光值。用内毒素工作标准品和样品的荧光差值（ΔRFU）
减去阴性对照的 ΔRFU 得到净 ΔRFU。净荧光差值 ΔRFU 的对数与内毒素浓度的对数呈比
例，且在 0.005 至 5 EU/ml 范围内呈线性，利用已知内毒素工作标准品浓度的对数和 ΔRFU
的对数做标准曲线，ΔRFU 对数为纵坐标，内毒素标准品浓度对数为横坐标，方程即 log
（ΔRFU）=A*log（内毒素浓度 EU/mL）+B，标准曲线相关系数 r 2 应≥0.980。根据标准曲
线可以计算样品中的内毒素浓度。
数据分析
1. 所有标准品及样品孔的一小时荧光值减去零小时荧光值得到荧光差值 ΔRFU；
2. 将各孔的 ΔRFU 值减去阴性对照孔（无热原水）的 ΔRFU 值，得到标准品和样品的
净 ΔRFU 值；
3. 计算内毒素工作标准品的净 ΔRFU 值和浓度（EU/mL）的对数；
4. 以内毒素工作标准品浓度的对数 log（内毒素浓度 EU/mL）为横坐标，净荧光差值的
对数 log（ΔRFU）为纵坐标绘制标准曲线图进行线性拟合，log（ΔRFU）=A*log（内毒素浓
度 EU/mL）+B，标准曲线相关系数 r 2 应≥0.980，示例如下：
5. 通过标准曲线，计算样品与加标样品的内毒素含量，并计算加标回收率：
加标回收率% =
（加标后样品内毒素浓度-未加标样品内毒素浓度） × 100% 实际加标内毒素浓度
注：实际加标内毒素浓度为 0.5 EU/mL
如内毒素的加标回收率在 50-200%范围内时，即认为对检测没有干扰，检测出的样品结果可靠.
重组C因子检测试剂盒
18512147755
苏公网安备 32058102001742号 
